Standardization of a rapid quadruplex PCR method for the simultaneous detection of bovine, buffalo, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes DNA in milk / [Padronização de um método rápido de PCR quadriplex para a detecção simultânea de DNA de bovino, bubalino, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em leite]

The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

Prebiotics and butyric acid can replace colistin as a growth promoter for nursery piglets / [Prebióticos e ácido butírico podem substituir a colistina como promotor de crescimento para leitões em fase de creche]

This study aimed to assess different prebiotic concentrations and principles, in addition to calcium butyrate, aiming to replace colistin as a growth promoter. The sample consisted of 120 piglets weaned at 22 days old with mean initial weight of 5.475 ± 0.719kg. The animals were assigned to random blocks in six treatments corresponding to the use of the following dietary additives: T1) colistin (40 ppm); T2) ß-glucan/mannan-oligosaccharides (0.2%); T3) calcium butyrate (0.1%); T4) ß-glucan/mannan-oligosaccharides (0.1%) + fructooligosaccharides (0.01%) + galactooligosaccharides (0.09%); T5) ß-glucan/mannan-oligosaccharides (0.1%) + fructooligosaccharides (0.03%) + galactooligosaccharides (0.07%); and T6) ß-glucan/mannan-oligosaccharides (0.1%) + fructooligosaccharides (0.05%) + galactooligosaccharides (0.05%). The results showed no difference among treatments for the performance parameters in any of the phases evaluated. For diarrhea incidence and intensity, the results indicated that the treatments with alternative additives had similar effects as the group treated with colistin. A significant difference was found for the profile of propionic acid (0.23% colistin and 0.32%, 0.36%, 0.37% additives) and total fatty acids (0.67% colistin and 0.97% additives) values in the caecum. The supplementation with different compositions and concentrations of prebiotics and butyric acid may viably replace colistin in controlling diarrhea and modulating volatile fatty acid production in the caecum.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar as diferentes concentrações e princípios de prebióticos e do butirato de sódio, visando substituir a colistina como promotor de crescimento. Foram utilizados 120 leitões, desmamados aos 22 dias de idade, com peso médio inicial de 5,475 ± 0,719kg. Os animais foram distribuídos em blocos ao acaso, em seis tratamentos, que corresponderam ao uso dos seguintes aditivos dietéticos: T1) colistina (40ppm); T2) ß-glucanos/mananoligossacarídeos (0,2%); T3) butirato de cálcio (0,1%); T4) ß-glucanos/mananoligossacarídeos (0,1%) + frutoligossacarídeos (0,01%) + galactoligossacarídeos (0,09%); T5) ß-glucanos/mananoligossacarídeos (0,1%) + frutoligossacarídeos (0,03%) + galactoligossacarídeos (0,07%); e T6) ß-glucanos/mananoligossacarídeos (0,1%) + frutoligossacarídeos (0,05%) + galactoligossacarídeos (0,05%). Os resultados mostraram que não houve diferença entre os tratamentos para nenhum dos parâmetros de desempenho em nenhuma das fases avaliadas. Para a incidência e a intensidade de diarreia, os resultados apontam que os tratamentos com os aditivos alternativos apresentaram efeitos semelhantes aos do grupo tratado com colistina. Foi encontrada diferença significativa para perfil dos ácidos graxos propiônicos (0,23% colistina e 0,32%, 0,36%, 0,37% aditivos) e ácidos totais (0,67% colistina e 0,97% aditivos) no ceco. A suplementação com diferentes composições e concentrações de prebióticos e do ácido butírico pode substituir a colistina de forma viável no controle da diarreia e na modulação da produção volátil de ácidos graxos no ceco.(AU)

Lisina digestível em dietas de baixa proteína para frangos de corte tipo caipira de um aos 28 dias / Digestible lysine in diets containing low protein concentrations for broiler type redneck from 1 to 28 days

Avaliou-se a inclusão de diferentes porcentagens de lisina digestível em dietas de baixa proteína para frangos de corte tipo caipira, machos e fêmeas, com idade entre um e 28 dias. Utilizaram-se 792 machos e 792 fêmeas de linhagem comercial, de um dia de idade, distribuídos em delineamento inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 2x6 (sexo x porcentagem de lisina digestível: 0,85; 0,90; 0,95; 1,00; 1,05 e 1,10%) com seis repetições de 22 aves. Não foi constatada interação (P>0,05) de sexo versus inclusão de lisina. Observou-se superioridade (P<0,05) dos machos em relação às fêmeas para todas as variáveis avaliadas. O ganho de peso dos frangos diminuiu linearmente (P<0,05) em função do aumento da porcentagem de lisina digestível na dieta e observou-se redução linear (P<0,01) nos consumos de ração e de proteína. O consumo de lisina digestível aumentou linearmente (P<0,01) em função do aumento de sua concentração na dieta. Não houve diferença (P>0,05) para conversão alimentar. Da composição centesimal da carcaça, apenas o percentual de matéria mineral foi influenciada (P<0,05) pela porcentagem de lisina digestível. Conclui-se que 0,85% de lisina para frangos tipo caipira de pescoço pelado atende à exigência nutricional de lisina digestível em dietas com baixa concentração proteica.

The inclusion of different percentages of digestible lysine in low-protein diets was evaluated for male and female free-range broiler chickens, from 1 to 28 days. We used 792 female and 792 male naked neck chickens a day in a completely randomized 2x6 factorial scheme (sex x percentages of digestible lysine: 0.85, 0.90, 0.95, 1.00, 1.05 and1.10%) with six replicates of 22 broilers. No interaction of sex versus lysine was found. Superiority was observed (P<0.05) in males compared to females for all variables.Weight gainof chickens decreased linearly(P<0.05) with increasing levels of digestible lysine in the diet. There was a linear reduction (P<0.01) in feed intake, protein and metabolizable energy. On the other hand, the consumption of digestible lysine increased linearly (P<0.01) with the increase of its concentration in the diet. There was nodifference (P>0.05) in food conversion.In the chemical composition of the carcass, only thepercentage of mineral matter was influenced (P<0.05) bydigestible lysine levels.It was concluded that the level of 0.85% for type redneck broiler meets the nutritional requirement of digestible lysine in diets containing lower protein concentrations.

Alterações histopatológicas da glândula mamária e qualidade do leite de cabras naturalmente infectadas com o CAEV / Histopathological changes in the mammary gland and milk quality of goats naturally infected with CAEV

Avaliou-se a influência do vírus da CAE nas características físico-químicas de amostras de leite de 54 cabras, sem predileção racial, distribuindo-as em dois grupos: cabras positivas e negativas para o teste de imunodifusão em gel de agarose. As amostras de leite foram submetidas à análise ultrassônica para obtenção de parâmetros físico-químicos - gordura, extrato seco, proteínas, lactose e densidade; realização de microbiologia - bactérias mesófilas (UCF/mL). Foram coletadas amostras de tecido mamário para exame histopatológico e imunohistoquímica. Não houve diferença significativa das características avaliadas entre os dois grupos; no microbiológico, não houve relação direta da presença de mesófilas associada à infecção pelo CAEV. Na histopatologia, observaram-se áreas com infiltração celular de monócitos, polimorfonucleares, plasmócitos, fibrose, ausência de morfologia normal do parênquima mamário, denotando processo inflamatório crônico; e foi confirmada a presença do vírus na glândula pela imunohistoquímica. Os resultados não mostraram relação direta da incidência da CAE como fator negativo no desenvolvimento do rebanho.

Aiming to evaluate the influence of CAE viruses in the chemical and physical characteristics of milk, the samples were collected from 54 goats, without racial predilection, these were divided into two groups: goats positive and negative according results of test Agarose Gel Immunodiffusion. Milk samples were ultrasonic analyzed to obtain physicochemical parameters (fat, solids, protein, lactose and density); performance microbiology (mesophilic bacteria - CFU/mL) and mammary gland samples were collected for evaluation histopathology and immunohistochemistry. The results of physical-chemical analysis showed no significant difference between the milk samples of two groups. In the microbiological analysis showed the presence of aerobic mesophilic bacteria, but this change is not associated with the presence of CAEV infection. On histopathology, there were areas with infiltration of mononuclear-leukocyte and polymorph nuclear, plasma cells, fibrosis and absence of normal morphology of the mammary tissue, indicating a chronic inflammatory process; and confirmed the presence of virus, in the gland, by immunohistochemistry. The results showed no direct relationship between incidence of CAE in the herd as a negative factor for its development, however it is known that the disease in its chronic nature, causes reduction in the productivity of the herd.

Inibição dos lentivírus de pequenos ruminantes por drogas antivirais / Inhibition of small ruminant lentivirus by antiviral drugs

Inibidores da enzima transcriptase reversa e da protease foram avaliados quanto ao seu efeito inibitório na replicação do Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) cepa CAEV Cork e do vírus Maedi-Visna (MVV) cepa K1514 cultivados em células fibroblásticas de caprinos. Os fármacos utilizados foram: lamivudina, didanosina, estavudina, zidovudina, efavirenz, atazanavir e lopinavir/ritonavir. A maior concentração utilizada para lamivudina, estavudina, zidovudina e efavirenz foi 500 ?M, para atazanavir foi 50 ?M e 5,0 ?M para lopinavir/r e didanosina. A atividade antiviral in vitro foi pesquisada por meio da avaliação da viabilidade celular através da redução do MTT e pela pesquisa de inibição dos efeitos citopáticos (CPE) dos vírus. A replicação dos vírus só não foi completamente bloqueada pelos inibidores de protease (IP) atazanavir e lopinavir/r enquanto os demais apresentaram eficácia antiviral significativa em diferentes concentrações. Os IP juntamente com o efavirenz, não mostraram atividade antiviral quando foram avaliados pela técnica de redução do MTT. Esses dados indicam que os fármacos inibidores da transcriptase reversa lamivudina, didanosina, estavudina e zidovudina são eficazes na inibição in vitro dos lentivírus de pequenos ruminantes.

Inhibitors of the reverse transcriptase and protease enzymes were evaluated for their inhibitory effect on the replication of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) strain CAEV Cork and of the Maedi-Visna virus (MVV) strain K1514 cultured in fibroblastic cells. The drugs lamivudine, didanosine, stavudine, zidovudine, efavirenz, atazanavir and lopinavir/ritonavir were used. The highest concentration used for lamivudine, stavudine, zidovudine and efavirenz was 500 ?M, for atazanavir it was 50 ?M and 5.0 ?M for lopinavir/r and didanosine. The in vitro antiviral activity was investigated by evaluating the cell viability by the MTT method and testing for inhibition of cytopathic effects (CPE) of the virus. The replication of the virus was not completely inhibited by the protease inhibitors atazanavir and lopinavir/r in the test for CPE, while the others drugs showed significant antiviral efficacy in different concentrations. The protease inhibitors together with the efavirenz did not show antiviral activity when they were assessed by the reduced MTT technique. These data showed that the reverse transcriptase inhibitor drugs lamivudine, didanosine, stavudine and zidovudine were effective in the in vitro inhibition of small ruminant lentivirus.

Indicadores de risco gravidico no Piaui. / Indicators of pregnancy risk in Piaui

O presente trabalho traduz estudo prospectivo sobre indicadores de risco gravidico no Piaui. Para tanto, foi elaborada ficha contendo indicadores socio-economicos e medico-cirurgicos, aos quais foram dados valores arbitrarios de 0 a 8. Considerou-se alto risco quando a soma de pontos foi maior ou igual 8, medio risco de 4 a 7 e baixo risco menor 4. Os dados foram obtidos na primeira consulta de gestantes assistidas nos servicos pre-natal da Maternidade Dona Evangelina Rosa (capital do Estado), do bairro Dirceu Arcoverde (periferico da capital) e zona rural da cidade de Barras, que dista 120Km da capital. Esses grupos populacionais apresentaram em comum o fato de pertencerem a classes sociais com limitados recursos financeiros e, por isso, dependentes, quase exclusivamente, da assistencia medica gratuita oferecida pelo Estado. Os resultados demonstraram que os problemas socio-economicos repercutem na aceitacao da gravidez e interferem negativamente na assistencia prenatal. Dentre os problemas medicos destacam-se a sifilis, os estados de hipertensao arterial, as lesoes pre-malignas e malignas do colo uterino e as infeccoes urinarias. Dos tres grupos em estudo, o que apresentou indice mais elevado de gravidez de alto risco foi o da zona rural de Barras, seguido daquele assistido no pre-natal da Maternidade Dona Evangelina Rosa

Tumores oculares na regiao de Botucatu (SP). / Tumors of the eye in the region of Botucatu (SP)

Estudo retrospectivo de 1970 a 1981 dos casos de tumores oculares diagnosticados clinica e anatomo-patologicamente no HC. da F.M.B. Encontramos 49 casos, com predominio da incidencia em caucasianos do sexo masculino. Acometimento de todas as idades em distribuicao que pode ser considerada uniforme se tomarmos todas as patologias em conjunto. Maioria dos tumores foram benignos e extraoculares

Comparacao de meios com sulfito na recuperacao de esporos de Clostridium perfringens tratados termicamente. / Comparision of the recovery capacity of three sulphite media for heat treated Clostridium perfringens spores

Tres meios com sulfito, disponiveis comercialmente, foram comparados quanto a sua capacidade de recuperacao de esporos de Clostridium perfringens tratados e tratados termicamente e quanto a producao de colonias negras. Os meios comparados foram Agar SFP (Shahidi-Fergunson-perfingens), Agar SPS (sulfito - polimixia - sulfadiazina) e Agar TSN (triptona-sulfito neomicina), incubados a 30 graus C/40 hs e 37 graus C/24 hs. As contagens em SFP e SPS nao foram estatisticamente diferentes. As contagens en TSN foram significativamente mais baixas. As contagens obtidas nas duas temperaturas de incubacao nao diferiram estatisticamente. Produziram-se colonias negra caracteristicas em SFP. Em SPS e TSN produziram-se colonias negras e brancas, tanto com esporos tratados como nao tratados termicamente, Progenies de colonias brancas, cultivadas nos tres meios considerados produziram colonias negras

A sindrome de Mayer-Rokitansky-KusterHauser. A proposito de tres casos. / Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.Apropos of 3 cases

Os autores estudam tres casos de pacientes com agenesias uterinas e vaginal. Discorrem sobre o historico, a embriologia e a etiopatogenia da sindrome de Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser. Relatam ainda a respeito do quadro clinico, do diagnostico e do tratamento, enfantizando a normalidade da funcao gonadal, com o surgimento dos carateres sexuais secundarios na epoca prevista, os meios que utilizaram para o diagnostico, bem como sobre a importancia do preparo psicologico e epoca oportuna para o tratamento da sindrome